細胞生物學
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MTT技術服務 流式細胞儀檢測技術服務 細胞培養技術服務
MTT技術服務
一、MTT原理
  四甲基偶氮唑鹽比色法(MTT方法),是通過快速簡便的顏色反應來檢測細胞存活數量。其原理是MTT可作為哺乳類動物細胞線粒體中琥珀酸脫氫酶的底物。當有活細胞存在時,線粒體內琥珀酸脫氫酶可將淡黃色的MTT還原成藍紫色的針狀甲月替(Formazan)結晶并沉積在細胞中,結晶物能被二甲基亞砜 (DMSO)溶解,用酶聯免疫檢測儀在570nm波長處測定其吸光度OD值,OD值的高低可間接反映活細胞的數量及其活性。
二、實驗步驟
1.  將對數生長期細胞用胰酶消化后配制成濃度為1-10×104個/ml的細胞懸液,按1000-10000個細胞/孔接種于96孔板,每孔加100μl。
2.  將平板置37℃、5%CO2濕度培養箱中24小時后,加入含有不同濃度受試樣本的培養液100μl,每個樣本不同濃度設平行的三個孔,對照組加不含樣本的培養液100μl,再放入培養箱中孵育24-72 小時。
3.  用快速翻板法倒掉培養液,每孔加入用無血清1640按5mg/ml新鮮配制的MTT溶液100μl,溫育4小時,使MTT還原為甲月替,再次倒掉上清液,每孔加DMSO(二甲基亞楓)200μl,用平板搖床搖勻后,使用酶標儀測定光密度值(OD)(參考波長450nm,檢測波長570nm),以溶劑對照處理細胞為對照組,按下述公式計算化合物對細胞的抑制率,并按中效方程計算半數抑制濃度IC50:抑制率(%)=(對照組OD均值-給藥組OD均值)/ 對照組OD均值 X 100%
三、樣品準備  
  
細胞株
 
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