質粒構建
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DNA 克隆

通過各種DNA克隆方法,可以短時、高效、保質地完成服務。我們專業的分子生物學團隊從設計到PCR克隆提供全方位的服務,
可以充分滿足您的實驗要求。

細菌的DNA克隆是把外源基因與克隆載體進行體外連接,繼而轉化宿主細胞,篩選出含有目的基因重組質粒的轉化子,
并將該轉化子大量擴增提取重組質粒的過程。

服務內容
1、PCR產物TA克?。菏褂肊x Taq或LA Taq等聚合酶擴增的PCR產物3′ 末端帶有一個“A”尾,
      可直接克隆至帶有“T”末端的載體上 (如pMD19 -T Vector等)。
2、目的基因亞克?。航心康幕虻鬧柿2捎妹蓋蟹椒寺≈遼唐坊謀澩鐫靨寤蚋腦旌蟮奶厥庠靨逕?。
3、以質粒為模板PCR擴增目的基因后克?。航柿I系囊歡渦蛄型ü齈CR加入酶切位點或將幾個不同來源
      的片段通過PCR拼接后進行克隆。
4、多片段高效克?。菏褂肅lontech公司獨創的In-Fusion克隆技術,可以通過同源重組,無需加入連接酶,
      將PCR產物一次性克隆至所需載體(目前成功的案例中最多一次克隆6個片段)。同時該方法也適用于擴增片
      段內含有克隆所用限制性酶切位點,酶切方法無法克隆的情況。


載體構建
通過各種DNA克隆方法,可以短時、高效、保質地完成服務。我們專業的分子生物學團隊從設計到克隆提供全方位的服務,
可以充分滿足您的實驗要求。

DNA克隆是把外源基因與克隆載體進行體外連接,繼而轉化宿主細胞,篩選出含有目的基因重組質粒的轉化子,
并將該轉化子大量擴增提取重組質粒的過程。

載體構建的基本步驟:
1、用限制性內切酶分別酶切消化表達載體或克隆載體,同時用相同的限制性內切酶酶切含有目的片段的載體;
2、瓊脂糖凝膠電泳,檢測酶切是否成功;
3、酶切成功,割膠回收目的片段;
4、用T4連接酶或其他相關的酶將載體骨架和目的片段連接;
5、連接產物轉化宿主如大腸桿菌,畢赤酵母或其他相關宿主;
6、.陽性克隆子的篩??;

根據載體上抗性基因篩選連接正確的重組子,提取重組質粒,酶切,驗證連接是否成功。

但最好的驗證方法是將重組子送交測序公司測序。

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